Главная >> Медицинские статьи >> Онкология

Новый метод скрининга онкологических заболеваний 'Онкотест - 2'

Резюме. Приведены результаты предварительных клинических испытаний нового метода скрининга онкологических заболеваний «Онкотест-2». На основе двухстадийной модели скрининга предложена программа снижения смертности от онкологических заболеваний.

Ключевые слова. Онкологические заболевания, скрининг, информационное обеспечение, программно-аппаратный комплекс «Онкотест-2»

ВВЕДЕНИЕ

Целесообразность скрининга злокачественных новообразований до настоящего времени остается предметом дискуссий, в связи с недостаточной информативностью, трудоемкостью и относительно высокой стоимостью скрининговых методик обследования (5, 12).

С другой стороны, уже проведенные и проводимые в настоящее время долгосрочные скрининговые программы диагностики рака молочной железы, шейки матки, толстой кишки, предстательной железы и др. наглядно свидетельствуют о значительном возрастании, при таких исследованиях, числа больных с начальными стадиями онкологических заболеваний и даже снижении смертности от некоторых видов рака в целом (4, 6-8).

На сегодняшний день почти для каждого из наиболее распространенных злокачественных новообразований разработан более или менее эффективный метод скрининговой диагностики, (маммография - для рака молочной железы, цитологические исследования мазков – для рака матки, тест на скрытую кровь в кале – для рака толстой кишки, PSA – для рака предстательной железы и т.п.). Вместе с тем, проводя скрининг того или иного онкологического заболевания с помощью вышеуказанных методов, можно легко пропустить злокачественную опухоль другого органа для выявления которой, эти методы не пригодны.

Разработанные универсальные скрининговые тесты для ранней диагностики рака (2), одновременное исследование у больного нескольких известных опухолевых маркеров (9), определение генетических изменений в клетках секретов и выделений (10), пока не получили широкого распространения в клинической практике, в связи, либо, с недостаточной диагностической эффективностью, либо высокой стоимостью.

Нами в течение последних 10 лет разрабатываются методы скрининга злокачественных новообразований с использованием в качестве материала исследования крови, которая с нашей точки зрения является наиболее удобным объектом для универсальных скрининговых тестов.
Первым из таких методов явился способ диагностики злокачественных новообразований, получивший название «Онкотест» (3, 11).Согласно гипотезе, на которой основан этот метод, опухолевые антигены оседают на поверхности эритроцитов, меняя их заряд и некоторые свойства. Антигены могут быть самыми разнообразными, в зависимости от вида и локализации злокачественной опухоли. Однако общим для них является то, что в их структуре присутствуют ионы кальция. Эти антигены мы условно называем кальций-белковыми комплексами (КБК).

Реактивы, наносимые на мазок крови онкологического больного, взаимодействуют с КБК, вызывая аглютинацию и выпадение в осадок эритроцитов, с образованием после высыхания характерного рисунка. У здорового человека КБК в крови отсутствуют, или их очень мало, поэтому аглютинации и выпадения в осадок эритроцитов не происходит. По мере высыхания реактивов силы поверхностного натяжения растягивают эритроциты к краям "пятна", центр которого остается прозрачным.
Для массовой обработки результатов обследований по методу Онкотест был разработан программно-аппаратный диагностический комплекс «Онкотест-1» (13).
За 6 лет испытаний и клинического использования была доказана высокая эффективность "Онкотеста", в качестве метода скрининговой диагностики онкологических заболеваний, вместе с тем проявились и ряд недостатков способа, препятствующих его широкому внедрению в медицинскую практику.

Этими недостатками являются:

Сложность приготовления мазков крови, пригодных для проведения реакции;
Необходимость поддержания заданных условий внешней среды (температуры, влажности, атмосферного давления) во время проведения реакции;
Субъективная оценка результата реакции, требующая длительного обучения;
Отсутствие количественного учета результата реакции, что делало невозможным ее использование для динамического наблюдения за обследуемыми.

Все эти недостатки учтены в новом методе скрининга онкологических заболеваний – «Онкотест–2». Новый тест основан на определении специфических веществ, выделяемых злокачественной опухолью, но уже не в цельной крови, а в сыворотке обследуемого. С наибольшей вероятностью эти вещества относятся к ядерным белкам или их составляющим. Реактивы, добавляемые к сыворотке обследуемого, взаимодействуют с этими веществами, образуя иммунные комплексы, которые проявляются на свету и изменяют оптическую плотность опытной сыворотки по сравнению с контролем.

На тест зарегистрирована заявка на изобретение в Украине.
В настоящей публикации представлены предварительные данные клинических испытаний «Онкотест–2» и предложена программа снижения смертности от онкологических заболеваний.

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалом для «Онкотест-2» служит сыворотка крови пациента в количестве 0,6 на одно исследование. Для проведения теста используются 4 реактива – N 1, 2, 3 и S для разведения сыворотки.Последовательно, с интервалом в 10 мин в пробирки для реакции вводится по 0,02 1,2 и 3-го реактива, и они помещаются под источник дневного света на 1 час.

Постановка всей реакции занимает не более 1,5 часа. Результат реакции определяется с помощью спектрофотометра.У онкологических больных оптическая плотность сыворотки с реактивами по сравнению с контролем под влиянием света увеличивается.

Оптическая плотность сыворотки крови здоровых людей под влиянием реактивов и облучения почти не изменяется, поэтому кривая результирующей оптической плотности сыворотки здоровых людей отличается от таковой у онкологических больных.

Для числового выражения результата теста необходимо измерить результирующую оптическую плотность сыворотки на длине волны 364 и 380-410 нм, а затем от второго результата (наибольшего показателя в интервале 380-410 нм) отнять первый. Если полученное значение будет меньше 0, т.е. со знаком минус, то тест отрицательный, а если со знаком +, то тест положительный (высокий риск наличия злокачественной опухоли). При нулевом значении - тест необходимо повторить в течение месяца.

Расчет результата теста можно представить в виде формулы:
Д рез. = Д 380-410нм - Д 364нм
Тест отрицательный 0 > Д рез. > 0 Тест положительный

Где, Д рез. - результирующая оптическая плотность;

Д380-410 нм - оптическая плотность исследуемой сыворотки в интервале 380-410нм;

Д364 нм - оптическая плотность исследуемой сыворотки на 364 нм.

Метод «Онкотест-2» начал использоваться в клинической практике с марта 2000 года. Всего изучены результаты обследования 748 человек. Пациенты, которые прошли обследование по данному методу, могут быть объединены в 3 группы:

Больные, поступившие на обследование и лечение в онкологические учреждения (391 чел.).
Здоровые люди в возрасте 17-30 лет, с доказанным отсутствием онкологического заболевания при клиническом обследовании (68 чел.).
Пациенты, обратившиеся на обследование без предварительного выяснения имеющихся у них заболеваний, с последующим (после проведения «Онкотест-2») уточнением состояния их здоровья (289 чел.).

РЕЗУЛЬТАТЫ КЛИНИЧЕСКИХ ИСПЫТАНИЙ

1. Онкологические больные

В группу обследованных по методу «Онкотест-2» вошли пациенты, лечившиеся в онкологических больницах города Киева и Киевской области, с различной локализацией и стадией злокачественной опухоли.

Реакция «Онкотест-2» проводилась до начала лечения, как правило, на второй день после госпитализации в отделение. Сопоставление результата теста и клинического диагноза осуществлялось после всестороннего обследования и лечения больного с обязательным морфологическим исследованием удаленной опухоли.

Результат «Онкотест-2» расценивался как истинно положительный (ИП) - при наличии онкологического заболевания и истинно отрицательный (ИО) - при его отсутствии. К ошибочным результатам теста относились ложно положительные (ЛП) - тест положителен, а рака нет, или ложно отрицательные (ЛО) - тест отрицателен, а онкологическое заболевание присутствует результаты. Данные обследования онкологических больных с помощью «Онкотеста-2» представлены в таблице 1. Диагностическая чувствительность (ДЧ) колебалась от 80,0 до 100 % и составила в среднем 92,8 %.

Таблица 1
Результаты обследования по методу "Онкотест-2" больных,
поступивших в онкологические клиники в 2000-2001 г.г.

Локализация опухоли
Число обследов.
Результат
ДЧ        ДС
       %

ИП
ЛО
ИО
ЛП

Молочная железа
89
75
3
6
5
96.2      54,5

Желудок
88
74
11
3
-
87.1    100,0

Толстая кишка
50
49
1
-
-
98.0         -

Прямая кишка
52
45
5
1
1
90.0      50,0

Матка в т.ч.:
шейка
тело
19
10
9
13
8
5
-
-
-
3
1
2
3
1
2
100.0    50,0

Мочевой пузырь
21
19
2
-
-
90.5        -

Почки
10
10
-
-
-
100.0      -

Предстат. железа
6
4
1
1
-
80.0    100,0

Кожа в т.ч.:
рак
меланома

13
13

11
10

-
2

2
1

-
-

100.0 100,0
83.3    100,0

Лимфома
6
5
1
-
-
83.3        -

Яичники
5
5
-
-
-
100.0      -

ВСЕГО
391
333
26
20
12
92.8      62,5
ЛО результаты отмечены у 26 (6,65 %) пациентов, у 2-х из них наблюдалась механическая желтуха, с интенсивным, ярко-желтым окрашиванием сыворотки крови, которая, по-видимому, и послужила причиной ЛО результата реакции.

В последующих наблюдениях у всех больных с высоким содержанием биллирубина в сыворотке крови тест был отрицательным.У остальных онкологических больных с ЛО результатом реакции причину ошибки теста установить не удалось. Обращает на себя внимание, что 18 из 24 таких больных (75,0 %) имели 3 – 4 стадии рака.

ЛП результаты теста отмечены у 12 обследуемых. В основном это больные с доброкачественными опухолями молочной железы и матки, подлежащие хирургическому лечению.

2. Обследование здоровых пациентов

В группу здоровых пациентов, или доноров вошли добровольцы в возрасте 17 – 30 лет. Всего 68 человек - 42 женщины и 26 мужчин. Перед проведением «Онкотест-2» все доноры прошли тщательное клинико-инструментальное обследование и признаны здоровыми.
Истинно-отрицательный результат теста был отмечен у 65 человек (95,6 %). У 3-х пациентов (все женщины) тест показал ЛП результат.

Выяснение причин ЛП реакций у этих людей позволило установить: двое принимали менее чем за 12 часов до теста лекарственные препараты (снотворное и поливитамины). Повторный тест без приема лекарств показал отрицательный результат. У третьей пациентки бабушка и тетка по линии матери болели раком молочной железы. При обследовании молочных желез (УЗИ, маммография) опухолей не обнаружено, определяются признаки диффузной мастопатии. Пациентка взята на диспансерный учет.

3. Скрининг онкологических заболеваний с использованием «Онкотест-2»

В данную группу включены пациенты, которые самостоятельно обращались на обследование по методу «Онкотест-2». Информация о состоянии здоровья этих людей до обследования отсутствовала. После получения результата «Онкотест-2» у пациентов выясняли причину, по которой они решили пройти тест, проводили клинический осмотр, а также направляли на дополнительные методы диагностики (УЗИ, эндоскопию, рентгенологические, биохимические и прочие исследования) с целью выяснения имеющихся заболеваний.

Всего, в течение 2002 года обследовано 370 человек. Уточненные данные о состоянии здоровья после «Онкотест-2» получены у 289. Среди них было 215 женщин и 74 мужчины. Средний возраст обследованных составил 47 лет.

Почти у 40 % пациентов имели место несколько различных заболеваний, однако, для упрощения оценки их влияния на результат теста, учитывалось только то заболевание, которое беспокоило пациента больше всего в период тестирования.

Пациентам объясняли, что тест не является методом окончательной диагностики рака, а служит первым этапом отбора (скрининга) людей с высоким риском развития онкологического заболевания, за которым, в случае положительной реакции, должно последовать тщательное клинико-инструментальное обследование и динамическое наблюдение.

В данной группе пациентов, дополнительное обследование проводили всем, независимо от результата «Онкотест-2».
За сутки до проведения «Онкотест-2» пациентам предлагали не принимать никаких лекарственных препаратов и алкоголь. Исключение составляли больные, которые не могли не принимать регулярно препараты, в связи с имеющимися у них заболеваниями (сахарный диабет, выраженная сердечно-сосудистая недостаточность, гипертоническая болезнь, состояние после тиреоидэктомии и пр.). У таких пациентов окончательный результат теста учитывался в динамике, т.е., если даже первоначальный результат «Онкотест-2» был положительным, проводилось второе и третье тестирование. Рост показателя по сравнению с исходным уровнем свидетельствовал о высоком риске наличия злокачественной опухоли.

Пациентам с отрицательной реакцией «Онкотест-2» рекомендовали повторное профилактическое обследование каждые 6 месяцев. Онкологическим больным, после радикальных операций в первый год рекомендовали обследование через каждые 3 месяца, во второй – 3 раза в год, и на третий – 1 раз в шесть месяцев.Предварительные результаты скрининга онкологических заболеваний с использованием «Онкотест-2» представлены в таблице 3.

Таблица 3
Данные о скрининге онкологических заболеваний с использованием "Онкотест-2"

Контингент обследованных
Число обследованных
Результаты

ИО
ИП
ЛП
ЛО

Практически здоровые люди
12
12

Беременные
4
3

1

Хронические воспалительные заболевания
91
83

8

Острые воспалительные заболевания
3
2
24.04.2006